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ELISA雙抗體夾心法有哪些常見問題?
更新時間:2025-08-29瀏覽:26次

  ELISA雙抗體夾心法有哪些常見問題?

  以下是ELISA雙抗體夾心法實驗中常見問題的系統分析及解決方案,本生技術小編結合多來源信息整理:

  一、樣本相關異常?

  假陽性/高背景?

  原因?:血液溶血或纖維蛋白未清除,血紅蛋白干擾顯色?

  對策?:3000rpm離心15min,取上清檢測,避免溶血樣本?

  稀釋線性異常?

  現象?:樣本孔OD值超出標準曲線范圍(>2.0或<0.1)?

  調整?:按10倍梯度稀釋重測,確保OD值在0.1-1.5區間?

  二、操作技術問題?

  洗滌不充分?

  表現?:整板均勻顯色(花板)或復孔CV>20%?

  優化?:洗板5次,每次拍板后更換吸水紙,避免交叉污染?

  孵育條件失控?

  溫度?:超過37℃導致非特異性結合增加(建議恒溫箱校準)?

  時間?:超過說明書建議時間(通常抗原孵育≤1小時)?

  三、試劑與設備問題?

  抗體配對不當?

  影響?:鉤狀效應(高濃度樣本假陰性)?

  驗證?:通過棋盤滴定確定最佳抗體濃度比?

  底物失效?

  判斷?:陽性對照孔顯色淺或無色?

  處理?:現配現用TMB,避光保存,避免金屬離子污染?

  四、數據分析異常?

  標準曲線擬合不佳?

  指標?:R2<0.99或低濃度點偏離?

  措施?:檢查標準品溶解是否充分,復孔重復性?

  靈敏度不足?

  標準?:最高濃度孔OD值應>1.0?

  提升?:延長封閉時間(2小時)或更換高親和力抗體?

  注:以上資料僅供參考,如需進一步了解產品詳情,可參考品牌供應商或技術老師。

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