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　　以下是關(guān)于人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明綜合整理：

　　BS-1394人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法，通過包被抗體捕獲樣本中的αNAG，再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合形成復(fù)合物。加入TMB底物顯色后，顏色深淺與αNAG濃度成正比，450nm波長下測定OD值計算濃度?。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被酶標(biāo)板?：96孔板?

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉(通常含100 μg/ml原液)，需用樣品稀釋液復(fù)溶后梯度稀釋?

　　檢測溶液?：包括生物素標(biāo)記抗體、HRP標(biāo)記親和素(需1:100稀釋使用)?

　　底物溶液?：TMB顯色液(A/B液需避光保存)?

　　終止液?：2N H2SO4溶液?

　　洗滌液?：30倍濃縮液，使用前需蒸餾水稀釋?

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：采集后離心(1000×g，10-20分鐘)，避免溶血或反復(fù)凍融?

　　細(xì)胞上清液?：離心去除顆粒物?

　　組織樣本?：需勻漿后離心取上清?

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋(如100→1.56 μg/ml)?

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：50μl/孔

　　樣本孔：40μl稀釋液 + 10μl樣本(5倍稀釋)?

　　孵育?：37℃溫育30-60分鐘?

　　洗滌?：用稀釋后的洗滌液洗板5次，拍干?

　　顯色?：每孔加TMB底物A/B液各50μl，避光反應(yīng)15分鐘?

　　終止?：加入終止液50μl，立即測定OD450值?

　　五、注意事項(xiàng)

　　試劑使用前需平衡至室溫(20-30分鐘)?

　　避免底物接觸金屬器械或強(qiáng)光?

　　不同批次試劑不可混用?

　　顯色后需在15分鐘內(nèi)讀數(shù)?

　　六、結(jié)果計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過曲線方程計算樣本濃度?。

　　如需具體品牌試劑盒的完整說明書，可參考技術(shù)老師

　　注：以上資料僅供參考，本說明綜合了多個廠商的通用流程，實(shí)際操作請以具體試劑盒說明書為準(zhǔn)?。

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