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犬白細(xì)胞分化抗原6(CD6)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書
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  犬白細(xì)胞分化抗原6(CD6)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書

  一、實(shí)驗(yàn)原理

  本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)犬CD6抗原:

  包被抗體:微孔板預(yù)包抗CD6單克隆抗體,特異性捕獲樣本中的CD6抗原。

  生物素標(biāo)記抗體:加入生物素標(biāo)記的多克隆抗體,與已結(jié)合的CD6形成“夾心"結(jié)構(gòu)。

  酶聯(lián)反應(yīng):通過(guò)HRP標(biāo)記的鏈霉親和素與生物素結(jié)合,催化底物TMB顯色,吸光度(OD值)與CD6濃度成正比。

  二、試劑與材料

  試劑組分:

  預(yù)包被微孔板(96T/48T)

  CD6標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度)

  生物素化抗體、HRP-鏈霉親和素

  TMB底物液、終止液、洗滌液(20×濃縮) 。

  儀器:酶標(biāo)儀(450 nm)、微量移液器、恒溫箱(37℃)、離心機(jī)。

  三、操作步驟

  樣本處理:

  血清/血漿:室溫凝固后離心(2000×g,15分鐘),取上清。

  細(xì)胞培養(yǎng)上清:直接離心去除顆粒物。

  組織勻漿:加PBS勻漿后離心取上清。

  檢測(cè)流程:

  加樣:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育1小時(shí)。

  洗滌:棄液后,用洗滌液洗板3次,拍干。

  加酶標(biāo)抗體:加入100μL生物素化抗體,37℃孵育30分鐘。

  顯色:加入TMB底物,避光反應(yīng)15分鐘,終止液終止反應(yīng)。

  結(jié)果計(jì)算:

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣本濃度通過(guò)曲線方程計(jì)算。

  四、注意事項(xiàng)

  試劑保存:未開(kāi)封試劑盒2-8℃保存,避免反復(fù)凍融;濃縮洗滌液需37℃溶解鹽結(jié)晶.

  干擾因素:避免樣本溶血、高濃度脂血或反復(fù)凍融.

  質(zhì)量控制:每個(gè)樣本設(shè)復(fù)孔,標(biāo)準(zhǔn)品CV值應(yīng)<10%.

  五、技術(shù)參數(shù)

  靈敏度:檢測(cè)限≤1.0 pg/mL。

  線性范圍:1.56–100 pg/mL .

  注:以上資料僅供參考,具體其他信息請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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