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微生物木質素(Lignin)ELISA檢測試劑盒技術說明書
BS-5184微生物木質素(Lignin)ELISA試劑盒
1. 產品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)，專用于定量檢測微生物發酵液、細胞裂解液等樣本中的木質素含量。木質素是微生物代謝或降解植物細胞壁過程中產生的芳香族聚合物，其含量變化可反映微生物對木質纖維素的利用效率?。
2. 檢測原理
固相抗體包被微孔板捕獲樣本中的木質素，再加入酶標記檢測抗體形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。洗滌后加入TMB底物顯色，450nm波長下測定吸光度，吸光度值與木質素濃度呈正相關?。
3. 試劑盒組成
組分 96孔配置 48孔配置 保存條件
微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 2-8℃密封干燥
標準品(木質素) 0.5mL×6管 0.5mL×6管 -20℃避光
樣本稀釋液 6mL 3mL 2-8℃
酶標抗體-HRP 10mL 5mL 2-8℃避光
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 室溫
TMB顯色液 9mL 4.5mL 2-8℃避光
終止液 9mL 4.5mL 室溫
封板膜 2張 2張 室溫
4. 樣本處理
4.1 微生物發酵液
8000×g離心10分鐘去除菌體
取上清液立即檢測或-80℃凍存(避免反復凍融)
4.2 細胞裂解液
超聲破碎后12000×g離心15分鐘
取上清液用PBS稀釋10倍后檢測
4.3 注意事項
樣本渾濁需0.22μm濾膜過濾
避免使用含疊氮鈉的樣本(抑制HRP活性)
5. 實驗步驟
5.1 試劑準備
洗滌緩沖液：蒸餾水稀釋20倍至1×工作液
標準品梯度：按說明書稀釋至0-60μg/mL
5.2 加樣
標準品/樣本各50μL加入對應微孔
37℃孵育30分鐘
5.3 洗滌
每孔加300μL洗滌液，靜置1分鐘后拍干
重復5次
5.4 顯色
每孔加酶標抗體100μL，37℃孵育30分鐘
洗滌后加TMB顯色液90μL，避光15分鐘
加終止液50μL終止反應
5.5 測定
450nm波長測定OD值(參考波長630nm)
6. 結果計算
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線。樣本濃度通過曲線方程計算，超出范圍需稀釋后復測。
7. 性能指標
參數 指標
靈敏度 ≤0.5μg/mL
檢測范圍 1-60μg/mL
精密度 批內CV<8%，批間CV<12%
回收率 85%-115%
8. 注意事項
試劑盒使用前需室溫平衡30分鐘
不同批號試劑不可混用
終止液含強酸，操作時佩戴防護裝備
顯色液避免接觸金屬離子
微量移液器需校準，避免交叉污染
9. 有效期
6個月(2-8℃保存)
10. 聲明
本產品僅供科研使用。
注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
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