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大鼠谷胱甘肽還原酶(GSR)ELISA試劑盒實驗說明書
BS-3507大鼠谷胱甘肽還原酶(GSR)ELISA試劑盒
一、實驗原理
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測大鼠谷胱甘肽還原酶(GSR)活性。 將抗大鼠GSR抗體包被于微孔板中，加入待測樣本后，樣本中的GSR與包被抗體結合。隨后加入生物素標記的檢測抗體，形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物。 加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素(SABC)后，通過TMB底物顯色，在450nm波長下測定吸光度(OD值)，OD值與樣本中GSR濃度呈正相關。
二、試劑盒組成
組分 48孔配置 96孔配置 保存條件
預包被酶標板 8×6條 8×12條 2-8℃
標準品(凍干) 1支 1支 2-8℃
標準品/樣品稀釋液 10mL 15mL 2-8℃
生物素化檢測抗體 60μL(100×) 120μL(100×) -20℃
生物素化抗體稀釋液 6mL 12mL 2-8℃
SABC復合物 6mL 12mL 2-8℃
TMB顯色液(A/B) 各3mL 各6mL 避光2-8℃
終止液 6mL 12mL 2-8℃
20×濃縮洗滌液 30mL 60mL 室溫
封板膜 2片 4片 室溫
說明書 1份 1份 -
三、樣本處理
血清/血漿樣本?：
全血室溫靜置2小時或4℃過夜，1000g離心20分鐘，取上清。
避免溶血或高血脂樣本，2-8℃可保存48小時;長期保存需-20℃或-80℃，避免反復凍融。
組織/細胞樣本?：
組織勻漿或細胞裂解后，離心取上清，蛋白濃度調整至推薦范圍。
四、實驗步驟
洗滌液配制?：
將20×濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍(如1mL濃縮液+19mL蒸餾水)。
標準品稀釋?：
取7支離心管，標注1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、空白(Blank)。
每管加入200μL標準品/樣品稀釋液，首管加入200μL標準品原液，混勻后逐級稀釋。
加樣與孵育?：
每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
棄去液體，洗滌3次(每次浸泡1-2分鐘)。
酶標抗體反應?：
每孔加入100μL生物素化檢測抗體(按1:100稀釋)，37℃孵育60分鐘。
洗滌3次。
SABC復合物反應?：
每孔加入100μL SABC復合物，37℃孵育30分鐘。
洗滌3次。
顯色與終止?：
每孔加入90μL TMB顯色液(A/B液等量混合)，避光37℃孵育15分鐘。
每孔加入50μL終止液，混勻后立即測定。
五、結果計算
以標準品濃度為橫坐標(X)，OD值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線。
根據樣本OD值代入標準曲線方程，計算GSR濃度。
六、注意事項
試劑保存?：
標準品、生物素化抗體需-20℃保存，避免反復凍融;其他組分2-8℃保存。
樣本處理?：
避免使用溶血、高血脂或渾濁樣本;組織樣本需充分勻漿。
操作規范?：
移液需精確，避免交叉污染;洗滌需ganj ，殘留液體影響結果。
儀器校準?：
酶標儀波長需校準至450nm，空白孔調零。
安全防護?：
終止液含硫酸，操作時佩戴手套和護目鏡。
七、預期結果
靈敏度：可檢測低至0.156ng/mL的GSR。
線性范圍：0.156-10ng/mL。
八、應用范圍
本試劑盒適用于大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞培養上清液中GSR的定量檢測，科研用途。
提示?：具體操作請以實際試劑盒說明書為準，實驗前需閱讀完整說明并確認組分完整性。
注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
