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人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-0279 人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒
一、實驗目的
本試劑盒用于定量檢測人血清、血漿及相關液體樣本中B細胞生長因子(BCGF)的濃度。
二、實驗原理
采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。微孔板預包被抗BCGF抗體，樣本中的BCGF與包被抗體結合后，加入生物素標記的檢測抗體形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的親和素，經TMB底物顯色，顏色深淺與樣本中BCGF濃度成正比。
三、試劑盒組成
預包被酶標板(96孔/48孔)
標準品(2700ng/L)
標準品稀釋液
生物素標記抗體
酶結合物(HRP標記)
顯色底物A/B液
終止液
20×濃縮洗滌液
封板膜
說明書
四、操作步驟
1. 試劑準備
將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)30分鐘
濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍備用
2. 標準品稀釋
取6個EP管，每管加150μL標準品稀釋液
首管加入150μL標準品原液混勻(1800ng/L)
依次倍比稀釋至2.5ng/L
3. 加樣
設空白孔(僅加稀釋液)、標準孔、樣本孔
每孔加100μL標準品/樣本(建議設復孔)
37℃孵育90分鐘
4. 洗滌
甩盡孔內液體，每孔加洗滌液350μL
靜置30秒后棄去，重復5次
拍干(勿用吸水紙直接接觸孔底)
5. 酶標反應
每孔加100μL生物素標記抗體
37℃孵育60分鐘
同法洗滌5次
6. 顯色反應
每孔加底物A/B液各50μL(避光操作)
37℃避光孵育15分鐘
每孔加終止液50μL終止反應
7. 檢測
30分鐘內用酶標儀測450nm波長OD值
繪制標準曲線(OD值 vs 濃度)
五、注意事項
試劑使用前需平衡至室溫，避免反復凍融
不同批號試劑不可混用，有效期前使用
加樣時間控制在5分鐘內，推薦使用排槍
洗滌需干凈，拍干時避免交叉污染
顯色劑B液避光保存，終止液有腐蝕性
樣本OD值超出標準曲線范圍時需稀釋重測
六、結果計算
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線
樣本濃度=標準曲線對應濃度×稀釋倍數
七、性能指標
靈敏度：<1號標準品濃度
線性范圍：2.5-1800ng/L(R2>0.99)
板內/板間變異系數<10%
八、樣本要求
血清：室溫凝固后離心取上清
血漿：EDTA抗凝，避免溶血
保存：-20℃可存3個月，避免反復凍融
(注：具體操作請以實際試劑盒說明書為準)
注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實驗依據，具體請咨詢技術老師是或品牌商。
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